El método de Ritchie

OBJETIVO

Aprender a realizar la técnica por sedimentación de Ritchie, para la búsqueda de quistes y huevos que puedan quedar sedimentados.

FUNDAMENTO

Existen dos procedimientos principales en las heces para su análisis: flotación y sedimentación.

La sedimentación es menos eficaz que la flotación para la concentración de quistes de protozoarios y abundantes huevos, pero es más útil para la búsqueda de huevos de esquistosoma y operculados.

El método de Ritchie o también llamado método de concentración en éter-formalina es una técnica de sedimentación que se basa en la concentración de huevos de helmintos, larvas y quistes de protozoarios mediante la centrifugación, con la ayuda de formol y éter para separar y visualizar los elementos parasitarios.

Entre las muchas ventajas que tiene este procedimiento están: 
1. Reune  y no deforma las posibles formas parasitarias
2. Permite que se pueda transportar y almacenar la materia fecal procesada antes de ser examinada, pues los agentes quimicos conservan a los parasitos que existan en la muestra
3. Se usa cuando necesitan una técnica para evaluación de tratamiento y determinación de frecuencia.

    

MATERIAL: v  Tubos de ensaye cónicos de 15 ml v  Embudo de cristal v  Vaso de precipitados 50 ml v  Gasa cortada en cuadro v  Aplicadores de madera v  Abatelenguas v  Pipetas Pasteur con bulbo v  Portaobjetos v  Cubreobjetos v  Gradilla v  Centrifuga v  Microscopio                                                                SUSTANCIAS: Ø  Solución salina isotónica Ø  Solución de formaldehído al 10% Ø  Éter etílico Ø  Solución de yodo-lugol Ø  Muestra biológica: heces fecales frescas PROCEDIMIENTO 1.    Tomar con el abatelenguas aproximadamente 1 gr de materia fecal y colocar en el vaso de precipitados, añadir 10 ml de solución salina y homogeneizar  2.    Se filtra la suspensión a través de la gasa doblada en cuatro partes y colocada en el embudo, recogiendo el filtrado en el tubo cónico.       3.    Centrifugar el filtrado a 2000 rpm por 2 minutos  4.    Decantar el líquido sobrenadante y resuspender con el aplicador de madera el sedimento con solución salina. Centrifugar nuevamente, decantar y resuspender dos veces más. 5.    Al último sedimento se agregan 5 ml de solución de formaldehído al 10%, se mezcla y se deja reposar durante 10 minutos en la gradilla 6.    Se añaden 0.5 ml de éter, se tapan los tubos y se agitan enérgicamente durante 30 segundos. 7.    Centrifugar durante 2 minutos a 2000 rpm 8.    Después de centrifugar se observan cuatro capas (se hablara de ellas mas adelante) 9.    Decantar el sobrenadante 10. Introducir la pipeta Pasteur hasta el sedimento, extraer con cuidado una gota del sedimento y colocarla en el portaobjetos 11. Añadir una gota de lugol y con uno de los ángulos del cubreobjetos homogeneizar, y cubrir con el mismo 12. Observar la preparación con al microscopio con objetivos. Se distinguen en esta de imágenes muchos restos vegetales, grasas y algunos quistes disperso..