viernes, 4 de abril de 2014

DETERMINACIÓN DE HEMATOCRITO


DETERMINACIÓN DE HEMATOCRITO

OBJETIVO
Aprender a realizar la prueba del hematocrito utilizando el macro y micrométodo, conocer su importancia en el diagnóstico de enfermedades y la forma adecuada de su procedimiento.
FUNDAMENTO
El hematocrito es un examen de sangre que mide el porcentaje del volumen de toda la sangre que está compuesta de glóbulos rojos. Esta medición depende del número de glóbulos rojos y de su tamaño. El resultado se expresa en porcentaje.
El hematocrito casi siempre se ordena como parte de un conteo sanguíneo completo (hemograma).
Para la realización de esta prueba, con el macrométodo, la sangre se extrae típicamente de una vena, por lo general de la parte interior del codo o del dorso de la mano.
Cuando se inserta la aguja para extraer la sangre, algunas personas sienten un dolor moderado, mientras que otras sólo sienten un pinchazo o sensación de picadura. Posteriormente, puede haber algo de sensación pulsátil.
Un volumen de sangre se deposita en un tubo de Wintrobe, por medio de una pipeta, hasta la marca del 10 y se debe de centrifugar. Al terminar la prueba, deben de quedar separados el plasma de la sangre y las células, depositándose en el fondo y presentando un color rojo intenso.
Para la realización del micrométodo, se utilizan unos tubos de un calibre muy delgado, llamados capilares, y pueden ser llenados con la misma sangre venosa o de capilar. Este último es el más usado, por ser más rápido y menos riesgoso al usar sangre capilar. Para su lectura se usa una escala estandarizada.
MATERIAL
  • Tubo de Wintrobe graduado de 0-100 mm
  • Pipetas Pasteur
  • Equipo para venopuncion (Tubo lila)
  • Tubos capilares azules o rojos
  •  Plastilina
  •  Encendedor o cerillos
  •  Centrifuga
  •   Microcentrifuga 

SUSTANCIAS:
  • Sangre venosa


PROCEDIMIENTO
Para macrohematocrito:
  1.  Llenar el tubo de Wintrobe con la sangre extraída con anticoagulante ayudándose de una pipeta Pasteur, comenzando desde el fondo hasta la marca superior de 100 mm, teniendo cuidado de no provocar espuma ni dejar burbujas en el tubo.
  2. Se recomienda como medida de precaución tapar el tubo con un tapón de goma para evitar la evaporación.
  3.   Centrifugar a 3000 rpm durante 30 minutos
  4. Leer directamente de la graduación la columna de glóbulos rojos y anotar resultados










Para Microhematocrito:  

  1. Tomar la muestra en capilares rojos heparinizados directamente del dedo, o utilizar capilares azules sin heparina para sangre venosa con anticoagulante EDTA. Debe llenarse aproximadamente 70-80% del capilar, sin dejar burbujas de aire.
  2. Ocluir (tapar) el extremo del capilar que no estuvo en contacto con la sangre, con plastilina o sellando con fuego.                  
  3.  Colocar el capilar sobre la plataforma del cabezal de la microcentrifuga, con el extremo ocluido adherido al reborde externo de la plataforma. 
  4. Centrifugar por 5 minutos entre 10 000 y 12 000 rpm.
  5.  Para leer el resultado, se lleva a cabo una regla de tres, midiendo el volumen total de plasma y eritrocitos o por medio de la regleta.
  6. Para la regleta, se sostiene el tubo frente a la escala de manera que el fondo de la columna de eritrocitos, quede exactamente al mismo nivel de la línea hroizontal correspondiente al cero.
  7. Desplazar el tubo a través de la escala hasta que la línea marcada con el 1.0 quede al nivel del tope del plasma.  El tubo debe de encontrarse completamente en posición vertical.
  8. La línea que pase al nivel del tope de la columna de eritrocitos indicara la fracción del volumen de estos.



      OBSERVACIONES
       Tras una centrifugación de la sangre total se pueden apreciar dos niveles, uno con el depósito de los glóbulos rojos, principalmente y en color rojo oscuro, otra capa blanca, de leucocitos y una delgada de color gris, que son plaquetas y finalmente otro nivel del plasma total, de un leve color amarillento. 
RESULTADOS
En el tubo de Wintrobe se mide directamente el nivel de la columna de glóbulos rojos, comparando el número de la lectura con los siguientes porcentajes:

Hombres: 47.0 ±5.0%
Mujeres: 42.0 ±5.0%
Niños (5 años) 38%-44%
Lactantes (3 meses): 37-42%
Recién nacidos: 50-58%

La sangre era de Virginia Pacheco Cárdenas , y el tubo de Wintrobe demostró un 47% de eritrocitos, estando en un rango normal.

En el tubo capilar, al comparar con la regleta, se obtubo un valor de 47%, al igual que el Wintrobe.

NOTA: Solo reportamos el resultado de una sola muestra, ya que la segunda no estaba en condiciones aptas para la realización de el estudio. Por lo cual el resultado no fue verídico

CONCLUSIÓN
Con el valor hematocrito se confirma el diagnostico de diferentes enfermedades y patologías, principalmente de las anemias y la policitemia. En esta prueba se mide la cantidad de eritrocitos de la sangre en porcentaje del total, o lo que es lo mismo, el porcentaje de células que transportan  oxígeno frente al volumen total de sangre, determinado por proceso de centrifugación. En este proceso, se pueden apreciar dos niveles, las células sanguíneas que se sedimentan, y el plasma total que flota. En definitiva es la relación porcentual entre ambos lo que representa el valor hematocrito.
Normalmente, el valor hematocrito se realiza en un análisis completo de hematimetría, donde consta el recuento de hematíes.
Los patrones de los valores del hematocrito  dependen de la edad y del sexo, así como de la altitud geográfica. Otra de las observaciones a tener en cuenta es que los valores varían de un laboratorio a otro, de ahí que en los resultados de las pruebas analíticas se pongan también los valores usados; no obstante los datos mostrados anteriormente son los más comunes y consensados.
De acuerdo a esto, un índice bajo de Hematocrito puede deberse a:
  •        Anemia
  •        Fallos en la médula ósea (Radiaciones, toxinas, fibrosis, tumores, etc.)
  •        Embarazo
  •        Hemorragias
  •        Hipertirodismo
  •        Hemolisis (destrucción de glóbulos rojos) por una transfusión
  •        Leucemia
  •        Problemas de alimentación
  •        Artritis reumatoide

Y un índice alto de Hematocrito puede deberse a:
  •        Cardiopatías
  •        Deshidratación
  •        Eclampsia (en el embarazo)
  •        Enfermedades pulmonares crónicas
  •        Exceso de formación de hematíes (eritrocitosis)
  •        Policitemia vera
  •        Choque (shock)


viernes, 28 de marzo de 2014

DETERMINACIÓN DE LA HEMOGLOBINA



DETERMINACIÓN DE LA HEMOGLOBINA


Objetivo:

Determinar cuantos gr de hemoglobina (Hb) hay en toda la sangre circulante, para tener un diagnostico clínico ya que se pueden variar diversas enfermedades debido a un valor anormal de Hemoglobina.

Fundamento:

La hemoglobina es una proteína conjugada que sirve para el transporte de oxígeno y dióxido de carbono. La masa total de eritrocitos de un adulto contiene unos 600gr. De hemoglobina capaces de transportar 800ml de oxígeno.

Una molécula de hemoglobina consta de 2 pares de cadenas polipepticas (unión de aminoácidos) (globina) y 4 grupos proteicos HEM que contienen cada uno un átomo de fe en estado ferroso. Cada punto HEM se localiza en una zona determinada de una de las cadenas de polipepticos. Localizando cerca la superficie de la molécula, el HEM se combina de forma reversible con una molécula de oxigeno y dióxido de carbono. Este grupo HEM es el responsable del del color rojo de la hemoglobina (hb).

La parte proteica o globina tiene 4 cadenas polipeptidicas que se denominan con las letras α, β, γ, δ. Existe una cadena mas la ε que esta presente durante los 3 primeros meses de vida se diferencian unas de las otras en el numero o posición (de los aminoácidos de los que están compuestas). Por lo tanto existen varios tipos de hb. en el ser humano se pueden encontrar las siguientes hemoglobinas normales:

Hemoglobina A: consat de 2 cadenas α y 2 cadenas β en un adulto normal corresponde a mas del 95% del total.

Hemoglobina A´: consat de 2 cadenas α y 2 cadenas δ en un adulto sano esta en porción menor de 3%.

Hemoglobina F (fetal): consa de 2 cadenas α y 2 cadenas γ. Es la hemoglobina principal en el feto desde el 4° mes del embarazo hasta aproximadamente los 6 meses de edad. La Hb F tiene mayor afinaidad por el oxigeno.

Hemoglobina Gower: consa de 2 cadenas α y 2 cadenas ε. Desaparece casi por completo en el tercer mes de embarazo y empieza a aparecer la Hb fetal.

Algunos datos se obtiene exmainando a simple vista una muestra de sangre. Un aspecto normal del suero o del plasma revela que el pigmento esta en los glóbulos rojos. Si se agita en una sangre total normal en el aire durante 15 min. Adquere un color rojo claro por convertir la Hb en oxihemoglobina.

La sangre tiene un color rojo cereza brillante cuando el pigmento es carboxi-hemoglobina en la intoxicación por CO. El color es chocolate en la metahemoglobulemia y la banda malvada en alsulfohemoglobulemia.

Las distintas Hb tienen espectros de absorción características a las que determina en un espectofotometro. La identificación de difrenetes formas de la Hbcon la determinación de sus espectros de absorción puede hacerse de una manera sencilla  

Material y Equipo:


·         Un colorímetro fotoeléctrico o un espectrofotómetro.

·          Una pipeta de vidrio graduada de 5 mL

·         Pipeta semiautomática

·          Tubos de ensayo.

·         Cubetas cuadradas.

·         Gradilla

·         gasa

Reactivos:


·         EDTA

·         Reactivo Drabkin

·         Ferrocianuro de potasio

·         Cianuro de potasio

·         Bicarbonato de potasio

·         Solución estándar de cianometahemoglobina

Reactivos biológicos:


·         Sangre venosa con EDTA.

Técnica:


1.-En un tubo de 13 x 100 colocar exactamente 5 mL de reactivo de Drabkin, marcarlo como problema (P)
.


2.-Obtener 5 ml de sangre venosa con anticoagulante (EDTA).

3.- Mezclar perfectamente la sangre problema, por inversión por lo menos 20 veces antes de tomar la muestra.



4.-Con una pipeta automática o pipeta de Shali se toma exactamente 0,02 mL (20 µL) de sangre total, limpiar luego la punta de la pipeta.



5.-La sangre tomada del tubo con EDTA se vierte en el tubo que contenga reactivo de Drabkin. Se enjuaga 3 veces y se mezcla.



6.- Mezcle la solución de Drabkin con la sangre por inversión y con mucha precaución (utiliza parafilm para tapar los tubos, recuerda que el reactivo tiene cianuro, el cual es un VENENO).



7.-Dejar en reposo por espacio de 3 a 5 minutos. Para que se  efectúe la reacción.


8.-Después de ese tiempo se observara una coloración roja transparente, se llena las cubetas hasta la marca que se encuentra y se procede la lectura.


9.-Leer en absorbancia con filtro verde a 540 nm llevando a cero el fotómetro con agua destilada / Drabkin.

Antes de hacer la medición con el espectrofotómetro hacer el siguiente procedimiento

PARA HACER LA MEDICION DE TRANSMITANCIA HACER EL SIGUIENTE PROCEDIMIENTO:



Medición de Transmitancia:


1.- Encender el Espectrofotómetro 30 minutos antes, después  seleccione la longitud de onda deseada (540 nm para Hb) con las teclas numéricas y oprima <GO TO>.  Aparecerá en la pantalla el valor numérico.

2.-Presine < %T> para Transmitancia.
     Aparecerá en la pantalla “T”.

3.-Insertemla cubeta con el blanco en el portacubeta, cierre la puerta y oprima <SECOND FUNCTION> Y <100 %>. Aparecerá En la pantalla 100.0 T.

4.-Remueva el blanco e inserte la muestra problema contenida en la celda y cierre la puerta.

Aparecerá en la pantalla el valor en Transmitancia.

5.-Si desea imprimir, oprima <PRINT> para avance de papel y/o una segunda vez para la impresión en el papel del espectrofotómetro o <SECND REMOTE>  para mandar a un dispositivo externo (a la computadora).

6.-Retire la cubeta del compartimiento y cierre la puerta (lave la cubeta y  guárdela).

7.- para entender lo hablado ver la imagen siguiente:

8.-Si no va usar más el aparato, apáguelo y cúbralo, si desea continuar trabajando, elija el modo de trabajo siguiente y continúe.


Resultado:


Este fue el resultado que nos salió en el espectrofotómetro.



Cálculos:

.353/.340 x 15 = 15.57

Rango:normal ya que la muestra es de un hombre adulto 

Hb total = concentración de Hb (gr/ml) x volumen sanguíneo (ml).

en espectofotometro se aplica la siguiente formula:

muestra/ estandar x 15 = Hb

Valores de referencia:

Niños al nacer…………………………….. 13,6 - 19,6 g/dL

Niños de 1 año…………………………..... 11,3 - 13,0 g/dL

Niños de 10 -12 años……………………... 11,5 - 14,8 g/dL

Mujeres……………………………………... 11,5 - 16,5 g/dL

Hombres……………………………………. 14,0 - 18,0 g/dL



Observaciones:

Al hacer la práctica notamos que para determinar este volumen que existe de Hb circulante en la sangre es fácil y sencillo de sacar ya que a la hora de meterlo al espectrofotometro prácticamente nos dice todo solo hay que sacar el resultado haciendo la operación básica que ya nombramos anteriormente.


Conclusiones:

Existen varios factores para determinar cuándo y con qué frecuencia se pueden realizar los exámenes. Su duración puede depender de los resultados o terminación de otros exámenes, procedimientos o tratamientos. Los exámenes pueden ser realizados inmediatamente en una emergencia o pueden ser demorados conforme una condición es tratada o monitoreada. Se puede sugerir un examen o llegar a ser necesario cuando aparecen ciertos signos o síntomas.


domingo, 10 de noviembre de 2013

MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR FLOTACIÓN DE WILLIS

MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR FLOTACIÓN DE WILLIS
Objetivo:
Realizar método de concentración por flotación simple.
Introducción:
Las técnicas de flotación permiten la separación de quistes de protozoos y huevos de ciertos helmintos del exceso de residuos mediante el uso de soluciones con elevada gravedad específica. Los elementos parasitarios son recuperados de la capa superficial y los residuos se mantienen en el fondo del tubo. Con estas técnicas los preparados son más limpios que los obtenidos por sedimentación. Sin embargo, algunos huevos (como los opérculados, o los densos como los estériles de Ascaris lumbricoides) no se concentran bien en las flotaciones; en estos casos se recomienda el uso de técnicas de sedimentación. De todas maneras, en las flotaciones se observa también el fondo del tubo para asegurar la recuperación de todos los posibles organismos. Con el fin de maximizar la eficacia en la detección de parásitos intestinales se recomienda el uso de ambos métodos diagnósticos de manera conjunta.
Frecuencia de recuperación de helmintos y protozoos mediante dos técnicas de flotación.
Fundamento:
Este método esta recomendado especialmente para la investigación de protozoarios y helmintos. Consiste en preparar la materia fecal con solución saturada de cloruro de sodio (NaCl).
Los huevos y los quistes de peso específico menor que la solución saturada de cloruro de sodio tienden a subir y adherirse a un cubreobjetos colocado en contacto con la superficie del líquido.
Material:
· Vaso de precipitados
· Embudo
· Gasa
· Tubo de ensaye
· Portaobjetos
· Cubreobjetos
· Abate lenguas
Reactivos
· Solución saturada de cloruro de sodio (NaCl)
·Solución de yodo-lugol
Muestra 
· Muestra de heces fecales
Procedimiento 
Tomar aproximadamente 1gr. De heces con un abate lenguas.
Colocar la muestra en un vaso de precipitados y mezclar con 10ml de solución saturada de cloruro de sodio.




En un tubo de ensaye filtre la mezcla con una gasa, llenando completamente el tubo.
Coloque un cubreobjetos sobre el tubo, de tal manera que el liquido haga contacto con el cubreobjetos.
 





5)    Esperar de 5 a 10 minutos.


6)    Los quistes o huevos flotaran y quedaran adheridos a la cara del cubreobjetos que esta en contacto con la mezcla de heces y cloruro de sodio saturado.




Colocar una gota de yodo-lugol sobre un portaobjeto, retirar el cubreobjetos con cuidado para evitar perdida del material y ponerlo sobre el portaobjetos.




8)   Examinar la muestra al microscopio con el objetivo de 40X, buscando quistes o huevecillos.   
  
Resultados:
               HECES FECALES 40X:
Encontramos un quiste de Entamoeba histolytica y fibras musculares.


Entamoeba histolytica
 Parasito común en el intestino grueso de los humanos. Muchos casos son asintomáticos excepto en humanos que viven bajo estrés. Esta se transmite a través de las excretas de personas infectadas, a través del agua o alimentos contaminados estos se presentan en quistes y después se pueden presentar en trofozoítos.