Recuento diferencial de leucocitos 

 El recuento diferencial de leucocitos consiste en reconocer y valorar las proporciones relativas de las distintas variedades de glóbulos blancos que se observan en un frotis teñido de la sangre.

Al conocer la proporción de las células sanguíneas que están presentes en el torrente sanguíneo, cualquier trastorno patológico que altere el sistema hematopoyetico podría verse reflejado en un cambio de la proporción de una especie celular. Para el recuento diferencial se tiene que observar un mínimo de 100 leucocitos.

Hay carios métodos de recuento diferencial de leucocitos pero el mas utilizado es el de almena lineal. 

Material y reactivos

1.- Frotis sanguíneo teñido

2.- Microscopio.

3.- Aceite de inmercion

4.- Un contador de células

Procedimiento para la Tincion de Wright

• Colocar el frotis secado al aire sobre una rejilla o cubeta de tinción con la sangre hacia arriba (ver figura 4). 
• Cubrir completamente el portaobjetos o cubreobjetos con el colorante de Wright gota a gota. Dejarlo que permanezca en el frotis aproximadamente de 5-8 minutos, para fijar los glóbulos sanguíneos. El colorante deberá cubrir completamente el portaobjetos, pero no debe derramarse por los bordes. Deberá agregarse una cantidad adicional si éste se comienza a evaporar. 
• Agregar directamente al colorante un volumen igual de amortiguador de Wright, para evitar la coloración débil. Esperar la formación de brillo metálico. Puede usarse de igual manera agua desionizada. Dejar actuar de 10-15 minutos. 
• Lavar con agua en el chorro cuidadosamente hasta que la extensión presente un aspecto rosado al examinarlo a simple vista. 
• Limpiar el dorso del portaobjetos con una gasa o algodón humedecido en alcohol para eliminar cualquier resto de colorante. 
• Secar al aire y observar con el microscopio con el objetivo de inmersión. 

Procedimiento para el recuento diferencial de leucocitos 

1.- Coloca el frotis en el microscopio y se enfoca.

2.-Se le agrega una gota de aceite de inmersión  y se observa con el objetivo de 100x.

3.-Si el recuento se hace en linea se empieza en un borde del frotis hasta el otro borde en linea paralela hasta contar 100 leucocitos.

4.- Se van contando los mononucleares (monocitos y linfocitos) y los polimorfo nucleares (neutrofilos, eosinofilos y basofilos) según su morfología.

5.- Se reporta el % (valor relativo) o en valor absoluto (mm3)

        

	Adultos	Niños
Linfocitos	20-55%	20-50%
Monocitos	2-6%	0-9%
Eosinofilos	1-5%	0-8%
Basófilos	0-1%	0-1%
Neutrófilos	45-70%	20-60%
Bandas	0-5%	1-6%

 

Resultados 

                                     Valores de referencia 

Leucocitos:  7-0            5-10 x 10°3%

Linfocitos :   35                   20-50%

Monocitos:    3                      2-9%

Eosinofilos:    7                     1-4%

Basofilos:       0                     0-1 %

Neutrofilos:    56                  45-70%

En banda:       0                       0-2%

COMENTARIO:

Lo importante de esta practica es conocer la variedad de morfología que podemos distinguir, con el fin de distinguir adecuadamente y clasificar cada uno de los leucocitos, así mismo, sugiero que sigamos practicando este trabajo 

Conteo de leucocitos

CONTEO DE LEUCOCITOS

INTRODUCCIÓN

El conteo de los elementos formes de la sangre es indispensable para la hematología diagnostica. Para contar lo leucocitos se diluye una cantidad exacta de sangre con liquido de Turk, que es una solución hipotónica que destruye a los eritrocitos  y conserva la estructura de los leucocitos, esta mezcla se coloca en una cámara de Neubauer Y se cuenta el número de células en los cuadros indicados.

MATERIAL Y REACTIVOS

1.   Pipeta de thoma para glóbulos blancos

2.   Una cámara de Neubauer

3.   Un microscopio

4.   Solución de Turk

5.   Gasas

6.    Sangre venosa con EDTA

PROCEDIMIENTO

1.- Obtener sangre venosa con EDTA y mezclar perfectamente

2. Aspirar sangne con la pipeta.de thoma hasta la marca 0.5

 3.- Limpiar la parte externa de la pipeta con gasa o papel absorbente.

4. Aspirar liquido de Turk hasta la marca 11

 

 5. Retirar la boquilla de la pipeta y sellar los extremos con papel parafilm

 6. Agitar la pipeta de thoma de 3 a 5 min. y preparar la cámara con el cubrehematímetro.

7. Descartar las primeras 3 gotas y llenar la cámara por capilaridad por uno de los bordes del cubrehematímetro, sin que se formen burbujas o sobrepasen los canales de la cámara.

 8. Dejar reposar de 3 o 5 mín. la cámara con la muestra.

9. Enfocar la cámara en eI microscopio y contar los leucocitos con el objetivo seco débil en 64 cuadros de las cuatro cuadriculas de los extremos

10.- Multiplicar el número de leucocitos contados por 50.

VALOR DE REFERENCIA

5 000 a 10 000/mm3

RESULTADOS

Muestra 1 (Manuel): 5,900 mm³

Muestra 2 (Omar): 8,400 mm³

 

Conclusiones: Esta practica es muy sencilla de realizar, con un resultado completamente confiable, siempre y cuando cada uno de los pasos a seguir sean adecuadamente realizados. En el caso de nuestras muestras , los resultados de ambos pacientes estuvieron dentro del parámetro establecido como NORMAL.   

Conteo de Reticulocitos

Reticulocitos 

 

Los reticulocitos se consideran glóbulos rojos inmaduros, prácticamente indiferenciables de los glóbulos rojos maduros, a menos que se les tiña con tinción supravital. El colorante azul de cresil o azul de metileno tiñe los restos de ácido ribonucleico en forma de red muy fina, los cuales permanecen en el citoplasma del eritrocito algunos días después de haber perdido su núcleo. Los reticulocitos tienen una duración de 24-48 horas después de que ha salido de la médula ósea para así convertirse en un eritrocito maduro en sangre periférica. Materiales y reactivos Tubos de ensayo Portaobjetos Pipetas de Pasteur con bulbo Sangre con EDTA Azul de metileno Técnica Colocar en un tubo dos gotas de sangre (aproximadamente 50µl por cada gota) y dos gotas de colorante. Agitar la mezcla sangre-colorante e incubar 15 minutos a temperatura ambiente. Hacer una extensión en un portaobjetos con una gota de la mezcla.        -Dejar secar y observar en objetivo de inmersión 100x. Contar 1000 eritrocitos, anotando el número de reticulocitos observados dentro de ese conteo. Resultados muestra 1  : Al realizar el conteo observamos 5 reticulocitos por cada 1000 eritrocitos. El porcentaje de reticulocitos se realiza de la siguiente manera % de reticulocitos = Número reticulocitos en 1000 eritrocitos % de reticulocitos = 0.5% Resultados muestra 2  : Al realizar el conteo observamos 7 reticulocitos por cada 1000 eritrocitos. El porcentaje de reticulocitos se realiza de la siguiente manera % de reticulocitos = Número reticulocitos en 1000 eritrocitos % de reticulocitos = 0.7% Nota: Los resultados de reticulocitos en pacientes anémicos deberán corregirse debido a que se presenta en una anemia una falsa impresión del número nuevo de eritrocitos que son producidos por el paciente anémico. Valores de referencia ·         Adultos: 0.5-1.5% ·         Niños: 2-5% Fuentes de error Cuerpos de Heinz que causan confusión, siderocitos y partículas de tinción precipitadas con reticulocitos (azul de metileno se utiliza para demostrar la presencia de cuerpos de Heinz) Conteo en áreas del frotis donde los eritrocitos no están distribuidos con uniformidad. No debe de haber superposiciones ni aglomeraciones en las áreas donde se efectúan los conteos. En el caso de muestras de pacientes anémicos, empleo de una cantidad insuficiente de sangre en relación con el tinte. En tal caso agregar 6 gotas de sangre con 3 colorante. Esplenectomía como resultado la presencia de otras inclusiones en los glóbulos rojos, los cuales se pueden confundir con los reticulocitos. Interpretación La cuenta de reticulocitos es un índice de eritropoyesis. Causas de aumento Anemia hemolítica y hemólisis. Pérdida aguda de sangre. En respuesta a un anemia después de una terapia específica. Ejemplo: Hierro, Vitamina B12, Ácido fólico. Desórdenes de médula ósea infiltrada. Causas de disminución Aplasia medular. Reemplazo de precursores eritrocíticos por células leucémicas. Infecciones Toxinas Drogas Enfermedad renal Desórdenes de maduració 1. Anemia Ferropénica. 2. Anemia Megaloblástica 3. Anemia Sideroblástica 4. Anemia por enfermedad crónica.

Índices Eritrocitarios (Valores absolutos)

 

Valor Hto%X10          = V.C.C  ENM3

N° Eritrocitos/L                    Valores normales : 82-92M3

 

 

 

Hb en  gr/dlX10        =H.C.M en pg

N° Eritrocitos/L                   Valores normales 28-32pg

 

 

Hb en gr/dlX10           = C.H.C.M en %

Valor Hto %                                Valores normales 32-36%

 

 

RESULTADOS

 

Conteo de eritrocitos: 3950,000

Hb:15.4 g/dl

Hto: 43.5%

Wintrobe:46%

V.C.C                                  H.C.M                             C.H.C.M.

435      =111.5M3                   154 g/dl = 39.48pg                 1540 gr/dl     = 35.4%     

 3.9/L                                         3.9/L                                       43.5    


Observaciones:
Los resultados que obtuvimos  en V.C.C y H.C.M  son valores altos considerando los parámetros normales.